真菌毒素亲和柱-快检卡-fapas质控样-湖南中科弘盛生物科技有限公司

iElisa 伏马毒素 B1 检测试剂盒

iElisa 伏马毒素 B1 检测试剂盒

1. 概要 伏马毒素是串珠镰刀菌、轮状镰刀菌和多育镰 刀菌等产生的。伏马毒素 B1 和 B2 是自然界存在 普遍且毒性较强的两种毒素。其主要存在于玉米及 玉米制品中，在大米、面条、调味品、高粱以及啤 酒中也有较低浓度的伏马毒素存在。1993 年伏马毒 素被癌症研究机构（IARC）归类为 2B 类致癌 物。 2. 原理 测定的基础是抗原-抗体反应。微孔板上包被有 抗抗体。加入伏马毒素标准品或样品、酶标抗原和 抗体后，游离的伏马毒素与酶标抗原竞争结合抗 体，抗体或抗体结合物与固定在微孔板上的抗抗体 再结合，没有结合的标准品、酶标抗原及抗体被洗 去，加入 TMB 底物显蓝色，加入终止液后颜色由 蓝变黄，用酶标仪在 450nm 处检测，吸光值与样品 中伏马毒素含量成负相关，与标准曲线比较即可得 出伏马毒素的含量。 3. 试剂盒的组成 1) 包被有抗抗体的96微孔板：1块（96 孔，12条 ×8 孔） 2) 伏马毒素B1标准品：0 ng/ml、2 ng/ml、 5ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、200ng/ml 1 瓶 × 1.0ml 3) Fum酶标抗原 1 瓶 ×10ml 4) Fum抗体 1 瓶 ×10ml 5) 10× 浓缩洗涤液： 1 瓶 × 50ml 6) Fum稀释缓冲液A： 1 瓶 ×50ml 7) Fum稀释缓冲液B： 1 瓶 ×50ml 8) 显色底物TMB： 1 瓶 ×17ml 9) 终止液： 1 瓶 × 7ml 10) 试剂盒说明书： 1 份 11) 质检报告： 1 份 4. 需要的仪器、试剂 1）仪器 —酶标仪 450nm（iElisa 全自动酶标仪或相当者） —微量移液器：20μl-200μl 单道，100μl-1000μl 单道, 50μl-300μl 八道 —多功能旋转混合器（或者摇床、高速均质器） —酶标板振荡器 —涡旋混合器 —50ml 离心管 —1.5ml 离心管 —定性滤纸 —过滤漏斗 —天平：感量 0.01g 2） 试剂 —样品提取液 70%甲醇：取 700ml 甲醇，加 300ml 纯水，混匀。 5. 样品处理 5.1 谷物（玉米、小麦、高粱、大米、大豆）： 1） 称取 5.0g 粉碎样品于 50ml 离心管中，加入 25.0ml 样品提取液 70%甲醇,置于多功能旋转 混合器上振荡 10 分钟（或使用高速均质器均质 3 分钟，或摇床上振荡 40 分钟）。 2） 将提取液用普通滤纸过滤，吸取 100μl 滤液置 于 1.5ml 离心管中，加入 400μl Fum 稀释缓冲 液 A，用涡旋混合器混匀。 稀释倍数：25 5.2 饲料： 1) 称取 5.0g 粉碎样品于 50ml 离心管中，加入 25.0ml 样品提取液 70%甲醇,置于多功能旋转 混合器上振荡 10 分钟（或使用高速均质器均 质 3 分钟，或摇床上振荡 40 分钟）。 2) 将提取液用普通滤纸过滤，用 0.22μm 有机系 滤膜过滤后，取 50μl 滤液置于 1.5ml 离心管中， 加入 450ul Fum 稀释缓冲液 B，用涡旋混合器 混匀。 稀释倍数：50 5.3 啤酒： 取 5ml 啤酒超声 5 分钟，取 100μl 超声后啤酒 样品于 1ml 离心管中，加入 900μl Fum 稀释缓冲液 B，用涡旋混合器混匀。 稀释倍数：10 6． 酶联免疫分析程序 6.1 测定之前注意事项 1) 使用前将所有试剂平衡至室温（20-25℃）。2) 使用后迅速将试剂放入 2-8℃冷藏。 3) 在 ELISA 分析中的再现性，很大程度上取决于 洗板的*性，正确的洗板操作是 ELISA 测定 程序中的要点。 4) 所有温育过程应避免阳光直射，并按要求用盖 板覆盖住酶标板。 6.2 溶液的配制 1) 提取液的配制: 根据实验所需的量配制 70%的 甲醇水溶液（水要用纯水、或蒸馏水、去离子 水） 2) 洗涤液的配制：将浓缩洗涤液用纯水稀释 10 倍后使用。（例如：取 10 ml 浓缩液+90 ml 纯 水, 可以用于 32 孔的检测）。 6.3 测定程序 1) 将足够标准品和样品所用数量的孔条插入酶 标板架，标准品和样品做两个平行实验，记录 下标准和样品的位置。未使用的酶标板用铝箔 袋封好置 2-8℃冷藏保存。 2) 吸取 50μl 标准品或样品分别加至相应的微孔 （双孔）中，然后各加入 50μl Fum 酶标抗原， 再加入 50μl Fum 抗体，加盖，在室温温育 30 分钟（每个标准品和样品必须使用新的吸头）。 3) 倒出孔中的液体，每孔加入 250μl 稀释好的洗 涤液，置于酶标板振荡器上振荡 30 秒钟（或 者手工振荡），重复操作四次。洗完后用力在 吸水纸上拍干。 4) 每孔加入150μl显色底物TMB，室温避光温育 10分钟。 5) 每孔加入50μl 终止液。 6) 置于酶标仪中，振荡混匀，在450nm处测定吸 光度值（OD值），参比波长630nm。（iElisa全 自动酶标仪可以直接读出、打印浓度值）。 7. 结果判定 1）所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的 平均值（B）除以*个标准（0 标准）的吸光 度值（B0）再乘以 100%，即百分吸光度值。 百分吸光度值（%）＝ B ×100% B0 以伏马毒素 B1 标准品浓度值（ppb）为 X 轴， 百分吸光度值为 Y 轴，绘制标准曲线图。相对应每 一个样品的浓度可以从标准曲线上读出。也可以用 回归方程法，计算出样本溶液浓度。利用计算机专 业软件，更便于大量样品的快速分析。 2） 样品的实际浓度为读数结果乘以相应稀释倍 数。 3） 如果测定值超出检测范围，样品提取溶液按一 定的比例用 70%甲醇进行稀释。 8. 注意事项 1) 室温低于20℃或试剂及样品未回到室温（20- 25℃）会导致数值偏低。 2) 在洗板过程中如果出现板孔干燥过久的情况， 则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现 象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。 3) 标准物质和显色液对光敏感，避免直接暴露在 光线下。 4) 混合要均匀，洗板要*（包括加样品和标准 液的时候都必需充分混合均匀）。 5) 终止液为强酸性物质，避免接触皮肤。 6) 不要使用过了有效期的试剂盒，也不要混合使 用不同批次的试剂盒，这样会引起测定结果不 准确。 7) 试剂盒的储存条件是2-8℃，切勿冷冻。 9. 试剂盒的性能指标 1) 检测限 LOD: 谷物 30ppb(μg/kg)，饲料 60ppb， 啤酒 15ppb（LOD：空白样品测定值+2 倍标准 偏差 SD） 2) 定量限 LOQ: 谷物 50ppb，饲料 100ppb，啤酒 20ppb。 3) 定 量 检 测 范 围 ： 谷 物 50-5000ppb ， 饲 料 100-10000ppb，啤酒 20-2000ppb。